赵沱 程涛 孙婧 白鹏飞
长链非编码RNA（lncRNA）广泛参与各项生命活动的调控过程，包括心力衰竭、心肌肥厚、心肌代谢疾病、心肌急性坏死等各心肌相关疾病[1]。锌指结构反义转录本1（ZFAS1）在心肌梗死小鼠模型中引起细胞Ca2+超载，诱导线粒体介导的细胞凋亡[2]。这表明ZFAS1在心肌疾病中有重要作用[3]，本研究观察ZFAS1 在稳定性心绞痛患者血清中的表达及其与临床指标的相关性。
1.1 研究对象
选取2019 年6 月至2021 年6 月长安医院108 例稳定性心绞痛患者为实验组，同期健康体检者78 例为对照组。实验组纳入标准：（1）符合稳定性心绞痛的诊断标准[4]；
（2）年龄＞15 岁；
（3）短期内未接受冠状动脉血运重建术。排除标准：（1）合并心功能不全或急性心肌梗死，且心功能Ⅲ级以上；
（2）不稳定性心绞痛或缺血性心肌病；
（3）伴有严重肝功能、肾功能不全；
（4）收缩压＞180 mmHg 或舒张压＞100 mmHg；
（5）近期有手术史；
（6）合并恶性肿瘤。所有受试者均签署知情同意书，并经医院伦理委员会批准。
实验组男59例，女49例，年龄（58.38±18.29）岁；
对照组男40 例，女38 例，年龄（56.22±15.30）岁，2 组受试者年龄（t＝1.293，P＝0.463）、性别构成（χ2＝0.204，P＝0.652）差异均无统计学意义。
1.2 氧化应激及内皮功能指标
所有患者抽取清晨空腹静脉血5 mL，测定血清一氧化氮（NO）、内皮素-1（ET-1）、超氧化物歧化酶（SOD）及脂质过氧化物丙二醛（MDA）水平；
NO 检测采用硝酸还原酶法（上海研拓生物科技有限公司）；
ET-1 测定采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法（上海研尊生物科技有限公司）；
SOD、MDA 测定也采用ELISA 法（武汉菲恩生物科技有限公司），均严格按照试剂盒步骤进行。
1.3 实时定量聚合酶链反应法检测lncRNAZFAS1表达
采用TRIzol 法提取血清总RNA，通过琼脂糖凝胶电泳技术及分光光度计测定RNA的浓度和纯度后；
取1 μg 总RNA 反转录为cDNA（lnRcute lncRNA cDNA 试剂盒，北京天根生物有限公司）；
实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）检测lncRNA-ZFAS1 表达。lncRNA-ZFAS1 上游引物为5"-ACGTGCAG ACATCTACAACCT-3"，下游引物为5"-TACTTCCA ACACCCGCAT-3"；
内参为β-actin，上游引物为5"-TGGCACCCAGCACAATGAA-3"，下游引物为5"-GTCATAGTCCGCCTAGAAGC-3"，所有引物由上海生工合成。95℃预变性5 min，95℃变性15 s，60℃退火40 s，72 ℃延伸30 s，进行40 个循环，重复3 次。反应结束后采用2-ΔΔCt计算lncRNAZFAS1 的相对表达水平。
1.4 统计学分析
采用SPSS 23.0 和Origin 9.1 进行数据分析，计量数据采用均数±标准差表示，组间比较采用独立样本t检验；
受试者工作特征曲线（ROC 曲线）评估lncRNA-ZFAS1 对稳定性心绞痛的早期诊断价值。以P＜0.05 为差异有统计学意义。
2.1 lncRNA-ZFAS1表达比较
与对照组相比，实验组患者血清lncRNAZFAS1 表达明显上调（1.14±0.37 对1.74±0.44），差异有统计学意义（t＝-7.338，P＜0.01）。
2.2 氧化应激及内皮功能指标比较
与对照组相比，实验组NO、SOD 水平下调，而ET-1、MDA 水平升高。见表1。
表1 2组氧化应激及内皮功能指标比较
2.3 lncRNA-ZFAS1对稳定性心绞痛的诊断价值
ROC 曲线评估lncRNA-ZFAS1 对稳定性心绞痛的诊断价值，曲线下面积（AUC）为0.788，95%CI 为0.723～0.854，Youden 指数0.507，敏感度为64.8%，特异度为85.9%。见图1。
图1 lncRNA-ZFAS1对稳定性心绞痛的诊断价值
非编码RNA 可通过调控转录或转录后水平、表观遗传学等多种途径参与多种生理病理活动，包括肿瘤的发生发展、神经系统功能调控[5-9]。
ZFAS1 位于含NFX-1 型锌指结构启动子区反义链上，已有多个研究发现ZFAS1 与癌症进展密切相关，吴峰等[10]发现肝细胞癌患者血清外泌体中ZFAS1 显著上调，并且与不良预后有明显的相关性。Zhang 等[11]发现lncRNA-ZFAS1/miR-589 介导磷酸酯酶与张力蛋白同源物/磷脂酰肌醇 3-激酶（PTEN/PI3K/AKT）信号通路调控乳腺癌细胞增殖、侵袭和迁移。研究发现ZFAS1 通过诱发心脏钙超载诱导心肌梗死模型小鼠心肌细胞凋亡[12]。在心肌纤维化模型的小鼠心脏组织中ZFAS1 表达显著升高，并且干扰lncRNA-ZFAS1 表达后，Ⅲ型胶原蛋白a1和转化生长因子β1 的表达明显下调，进而抑制心肌纤维化进展[13]。本研究发现，与健康体检者相比，稳定性心绞痛患者血清中ZFAS1 表达显著升高，采用ROC 曲线评估其对稳定性心绞痛的诊断，AUC 为0.788。ZFAS1 对心脏的影响机制可能包括：（1）作为微小RNA（miRNA）的分子海绵，与miRNA 靶向结合，调控miRNA 靶基因mRNA 的翻译过程；
（2）影响细胞通路调控心肌细胞凋亡、增殖及迁移；
（3）通过调节细胞氧化应激传导、分子代谢、Ca2+通道等影响心肌功能[3,14-15]。
氧化应激和内皮功能异常是稳定性心绞痛重要的发病机制。本研究还发现实验组NO、SOD水平下降，而ET-1、MDA 水平升高，与既往研究一致。
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